遨游分子的海洋——睿与凡生物分子生物学实验服务

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楼主 2020-10-01 13:25:32
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核酸提取

高质量DNARNA是基因获取的前提条件,本公司利用提取试剂盒,涵盖了动物组织、细胞、血液等样品,可以为客户提供高质量的DNA/RNA样品,满足客户普通PCRqPCR、文库构建、基因调取、分子标记、基因杂交等各种科研需求。

目的基因的获取和克隆

(1)以基因组DNA或cDNA为模板PCR扩增得到目的基因;

(2)目的基因PCR产物的纯化及测序。

实时荧光定量PCR检测

(1)根据目的基因设计引物及引物合成

(2)RNA抽提+逆转录

(3)RNA定量及质量分析

(4)使用荧光染料SYBR Green法进行实时定量PCR(重复三次)

(5)数据处理

circRNA引物设计合成

circRNA因其成环的结构与mRNAlncRNA等相比有着特殊性,其qPCR引物设计成为难点。本公司团队专注circRNA研究多年,有qPCR技术丰富的技术人员为您提供专业的circRNA qPCR引物设计,直接为您提供合成好的circRNA qPCR引物。

本公司提供的引物经过多方面严格的验证,包括qPCR的扩增曲线、溶解曲线、产物的琼脂糖凝胶验证、产物的测序验证。引物报告包含以上三方面的数据,为您的circRNA研究提供严谨的引物。

circRNA验证及qPCR检测

circRNA实时定量PCR检测时高通量筛选后验证的必选实验,基于qPCR检测技术的circRNA表达与差异分析是对测序、芯片结果的有效补充和验证,是确定研究对象并进行后续功能研究或分子标志物筛选的基础。本公司根据circRNA的闭合环形结构,针对其接头序列设计Divergent primers,能有效与线性RNA区分开来,排除线性RNA干扰。我们专业的引物设计和PCR反应体系优化,可有效保障检测数据的准确性和可靠性,可检测包括细胞、组织、血液和外泌体等多种样本中circRNA差异表达情况。

基因克隆和载体构建

载体构建是分子生物学研究中最常用的实验技术。本公司拥有一支经验丰富、优秀刻苦的分子生物学实验技术队伍。可根据您的实验要求为您完整各种载体的构建及改造。

1)目的DNA片段和载体的制备;

2)目的DNA片段和载体的连接;

3)连接产物的转化;

4)克隆筛选。

质粒抽提

质粒是分子生物学实验中不可缺少的工具载体。高质量的质粒提取是下游试验顺利进行的可靠保证。质粒提取过程中,由于革兰氏阴性细菌自溶或其他原因的破坏,会从其细胞壁上释放出毒性脂多糖,即内毒素,影响细胞转染的效率,为此我们提供转染级无内毒素质粒提取服务。根据客户提供的样品进行质粒提取,可一次性提取5-200μg的质粒,并通过测定OD值检测质粒纯度。提取后的质粒能够用于转染,内毒素水平<0.1E.U./μg

circRNA过表达载体构建

circRNA由于结构的特殊性,与microRNAlncRNA有着很大差异,让研究者对于它的功能的研究也是难于开展。本公司经过不断设计、验证和优化,优化出了特异性准确过表达circRNA分子的载体。载体含有表达circRNA的表达框,可以在细胞内通过RNA剪接形成circRNA分子;广大研究者可以将目标circRNA的线性序列PCR扩增出来,直接连接到载体上生成目标circRNA分子。

circRNA干扰

本公司针对circRNA的接头序列设计siRNA序列特异性敲低目的circRNA的表达。对于每条选定的siRNA靶序列,设计siRNA正义链和反义链,以loop9nt or 10nt)相连,形成稳定的发卡RNA,即为shRNA,可构建shRNA质粒直接转染或通过病毒包装后转染细胞,并对转染细胞进行阳性鉴定和转代细胞株的培养,最终实现对特定circRNA特异性敲低的作用。

慢病毒包装

慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。本公司提供慢病毒载体构建、RNAishRNA)、miRNAcircRNA过表达和干扰慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。

荧光原位杂交(FISH)

荧光原位杂交技术是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNARNA分子杂交,通过在荧光显微镜观察荧光信号,来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,或者是结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。

RNA免疫共沉淀(RIP)

RIPRNA immunoprecipitation)实验是基于蛋白研究RNA-蛋白相互作用的技术,该技术是全基因组水平的检测技术,适合体内研究。使用RIP级别的抗体,通过偶联磁珠,把结合在蛋白上的核酸分子抓取下来做后续分析,如芯片分析,RT-PCR或下一代测序等。

染色质免疫共沉淀(CHIP)

CHIP是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法,它不仅可以检测体内反式作用因子与DNA的相互作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达关系。CHIP能够充分反映生理调节下DNA与蛋白质相互作用的真实情况,可以找出生理条件下某个DNA结合蛋白与DNA序列的结合位点,从而反映体内基因表达调控的真实情况。


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